1  马铃薯品种脱毒

　　马铃薯在种植过程中易感染病毒，当条件合适时就会在植物体内增殖、转运和积累于所结的薯块中，并世代传递，逐年加重。因此通过茎尖组织培养技术脱除严重影响马铃薯退化减产的主要病毒：PVX、PVY、PVS、PVA、PLRV、PSTVd等，来获得无病毒植株。

1．1 脱毒材料的预培养

1．1.1选择材料

　　在生长环境好，土质优越，真细菌侵染少，病虫害控制最轻，无杂株的田间，选择健康植株，待薯块收获后备用。

1．1.2消毒

　　将已选的块茎先进行表面消毒，再栽入无菌盆中，并放入温室中进行栽培，注意要及时浇水，出苗后水应直接浇在土壤中，不能浇在叶片上。同时，给植株定期喷施内吸杀菌剂（链霉素0.1%和多菌灵0.1%）的混合液。

1．1.3培养

　　不断浇水并喷施杀菌剂，观察待植株长到能够剥离茎尖时取其顶芽进行剥离。

1．2 茎尖剥离

1．2.1准备阶段

　　清洗所用的全部器皿、用具，并将其灭菌消毒。然后完全按照茎尖培养基的配方，配制好所用的培养基，预培养3d，熏蒸接种室3d，并开启接种室内、超净工作台的紫外灯，杀菌30min，准备好解剖镜、解剖刀、解剖针，取已准备好的顶芽进行茎尖剥离。

1．2.2剥离茎尖

　　将供剥材料放在一块湿润的滤纸上，将材料的顶端分生组织及其下方的1—2个幼叶原基取下，然后将所取叶原基接种到茎尖培养基上。

1．2.3茎尖组织培养

　　将接好的组织放入光强在2000lx∽6000lx、温度在23℃∽27℃的光照培养箱中培养，前期光强要弱，4周后逐渐加强，待茎尖长到25px时光照增至4000lx，温度为25℃左右。

1．2.4再培养

　　当植株培养到能够转接时，再在无菌条件下将其转接到快繁培养基中培养3周（组培室温度为23℃-27℃，干湿度为70%-80%）。

1．2.5高温处理

　　将培养材料放入控温箱中，采用40℃（4 h）∽20℃（20 h）两种温度交替处理12周。

1．2.6再次进行茎尖剥离

　　重复以上1.2.2∽1.2.4培养脱毒苗,病毒检测合格后备用。

2  脱毒苗组培快繁

2．1 洗涤

　　清洗所有的化学实验器皿，对配制培养基所用的培养瓶先用84消毒液或高锰酸钾溶液（新购来的用36%盐酸）浸泡，再肥皂液清洗后用自来水冲洗干净。

2．2 培养基配制、灭菌

2．2.1母液的配制和保存

　　为了减少工作量,一般配成比所需浓度高10倍∽100倍的母液，用时按比例稀释。马铃薯快繁培养基按不同品种改良MS培养基母液配方进行配制，配好的母液应存放在4℃的冰箱中。

2．2.2培养基的配制

　　配制培养基时要预先做好准备,先将蒸馏水加入容器中并加热使卡拉胶溶解，加入量取的母液，再倒入所称的蔗糖，调试PH值后开始进行灌装封口。

2．2.3培养基的灭菌

　　将封灌好的培养基装入高压灭菌锅中开始灭菌,待压力表示数上升到0.5Mpa时进行第一次排气,待气压恢复至0时,关闭放气阀,继续升温,待压力在0.8Mpa∽1.1Mpa时灭菌17min∽20min,打开排气阀,取出培养基冷却备用。

2．2.4培养基的预培养

　　将灭完菌的培养基放置到已消毒好的培养室,观察3d,没有出现污染的培养基开始投入使用。

2．3 接种

　　先将接种室用甲醛和高锰酸钾进行熏蒸2d,然后打开在紫外灯杀菌25min,再用75%酒精喷雾消毒,最后在超净工作台将已准备好的脱毒苗剪成单芽阶段接到所配制的培养基中，接完后放入控温阳光组培室进行快速培养。

2．4 组培室培养

　　把已接好的马铃薯脱毒苗置于培养架上，调节培养室内的温度，控制在23℃∽27℃之间，光强在2000 lx∽3000 lx之间，每隔7d检查一次，若发现污染苗，立即转移到组培室外，对于无污染的健康苗在25d后开始炼苗，7d后投入使用，移栽至阳光温室生产原原种。